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第422章多分子克隆（第2页）

常用的λ噬菌体的dna是双链。

长约49kb，约含50个基因，其中50%的基因对噬菌体的生长和裂解寄主菌是必需的，分布在噬菌体dna两端。

中间是非必需区，进行改造后组建一系列具有不同特点的载体分子。

λ载体系统最适用于构建真核生物基因文库和cdna库。

m13噬菌体是一种独特的载体系统，它只能侵袭具有f基因的大肠杆菌，但不裂解寄主菌。

m13dna（rf）在寄主菌内是双链环状分子，象质粒一样自主复制。

制备方法同质粒。

寄主菌可分泌含单链dna的m13噬菌体，又能方便地制备单链dna。

用于dna顺序分析、定点突变和核酸杂交。

接着是dna载体的连接。

dna分子与载体分子连接是克隆过程中的重要环节之一，方法有:1粘性末端连接，dna片段两端的互补碱基顺序称之为粘性末端，用同一种限制性内切酶消化dna可产生相同的粘性末端。

在连接酶的作用下可恢复原样，有些限制性内切酶虽然识别不同顺序，却能产生相同末端。

2平头末端连接，用物理方法制备的dna往往是平头末端，有些酶也可产生平头末端。

平头dna片段可在某些dna连接酶作用下连接起来，但连接效率不如粘性末端高;3同聚寡核苷酸末端连接。

4人工接头分子连接，在平头dna片段末端加上一段人工合成的、具有某一限制性内切酶识别位点的寡核苷酸片段，经限制性内切酶作用后就会产生粘性末端。

连接反应需注意载体dna与dna片段的比率。

以λ或cos质粒为载体时，形成线性多连体dna分子，载体与dna片段的比率高些为佳。

以质粒为载体时，形成环状分子，比率常为1∶1。

最后是引入寄主细胞。

常用两种方法:1转化或转染，方法是将重组质粒dna或噬菌体dna（m13）与氯化钙处理过的宿主细胞混合置于冰上，待dna被吸收后铺在平板培养基上，再根据实验设计使用选择性培养基筛选重组子，通常重组分子的转化效率比非重组dna低，原因是连接效率不高，有许多dna分子无转化能力，而且重组后的dna分子比原载体dna分子大，转化困难。

2转导，病毒类侵染宿主菌的过程称为转导，一般转导的效率比转化高。

此时的李安，操控着墨莲人。

不断的收集材料，进行着研究。

三级文明，分子克隆有很多的作用！

分子克隆技术是发展起来的不久。

它的出现和应用开辟了分子遗传学研究的新领域，打开了人类了解、识别、分离和改造基因，创造新物种的大门。

它的成就对于工业、农牧业和医学产生深远影响，并将为解决世界面临的能源、食品和环保三大危机开拓一条新的出路。

利用分子克隆技术已将胰岛素，人、牛和鸡的生长激素、人的干扰素、松弛素、促红细胞生长激素、乙型肝炎病毒抗原和口蹄疫病毒抗原的基因制成工程菌，利用发酵工业进行了大规模生产。

还可提高微生物本身所产生的蛋白酶类和抗生素类药物的产量。

通过遗传工程看到癌细胞具有逆转为正常细胞的可能性，例如sv40病毒引起的小鼠肿瘤细胞。

在温度高时可逆转为正常细胞。

为治疗半乳糖血症，用带有大肠杆菌乳糖操纵子的λ噬菌体去感染半乳糖血症患者的离体培养细胞，发现这种细胞的半乳糖苷酶达到了正常水平。

并确实能代谢半乳糖。

通过遗传工程看到癌细胞具有逆转为正常细胞的可能性，例如sv40病毒引起的小鼠肿瘤细胞，在温度高时可逆转为正常细胞。